解決方案 | 固相萃取-LC-MS/MS測定牛血清中的全氟化合物

前言

全氟和多氟烷基化合物（PFAS）由數(shù)千種物質(zhì)組成，由于其含有極其穩(wěn)定的碳氟鍵，使得此類物質(zhì)具有很強(qiáng)的化學(xué)穩(wěn)定性、表面活性、優(yōu)良的熱穩(wěn)定性和疏水疏油性，被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)和生活消費(fèi)領(lǐng)域，PFOA、PFOS、PFHxA、PFHxS等都屬于PFAS。

PFAS被廣泛應(yīng)用于日用品、食品包裝等產(chǎn)品，人們在日常生活中使用這些包含PAFS的消費(fèi)品從而接觸到該物質(zhì)，大部分的PFAS如PFOA和PFOS，不會(huì)在環(huán)境或人體內(nèi)分解，長時(shí)間在生物體內(nèi)存留，隨著時(shí)間的推移，人體會(huì)產(chǎn)生諸多健康問題。

本實(shí)驗(yàn)參考《超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道肼高分辨質(zhì)譜法同時(shí)測定血清中12種全氟化合物》，利用萊伯泰科SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)和M64高通量平行濃縮儀進(jìn)行相關(guān)方法研究。

1、實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，萊伯泰科

M64高通量平行濃縮儀，萊伯泰科

液質(zhì)聯(lián)用儀：Exion LC™ + Triple Quad™ 4500，SCIEX

10種PFAS標(biāo)準(zhǔn)使用液：200ng/mL，溶劑體系為甲醇

M2PFOA和M4PFOS（內(nèi)標(biāo)）使用液：1μg/mL，溶劑體系為甲醇

HLB固相萃取柱：30mg/1mL，萊伯泰科

1.2前處理過程

1.2.1樣品制備

在15mL離心管中分別加入500μL牛血清、內(nèi)標(biāo)（20ng/mL）50μL，pH=5.0的乙酸-乙酸銨緩沖溶液250μL，漩渦混勻后于37℃水浴4h。

冷卻至室溫后加入500μL乙腈，漩渦混勻，然后在10000 r/min條件下離心10min，取上清液置于20mL樣品瓶，按照圖1所示的方法進(jìn)行固相萃取實(shí)驗(yàn)。

圖1 血清中全氟化合物固相萃取流程

洗脫液在60℃條件下氮吹至近干，加入1mL 96%甲醇進(jìn)行復(fù)溶，然后過0.22μm濾膜轉(zhuǎn)移至樣品瓶待 LC-MS/MS分析。

1.2.2加標(biāo)樣品測定

取6個(gè)15mL離心管，分別加入500μL牛血清、內(nèi)標(biāo)（20ng/mL）和全氟化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（20ng/mL）各50μL，然后按照步驟1中的操作進(jìn)行前處理，最后得到樣品加標(biāo)溶液待LC-MS/MS分析。

1.3LC-MS/MS測定條件

色譜柱：Shim-packVeloxC18（2.7μm，2.1*100mm）

柱溫：40℃

進(jìn)樣量：10μL

流動(dòng)相：A:20mmol/L乙酸銨水溶液，B:甲醇（梯度洗脫程序見表1）

流速：0.30mL/min

檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），定量、定性離子對(duì)見表2

表1 梯度洗脫程序

表2目標(biāo)物的MRM選擇離子對(duì)

2、測定結(jié)果

2.1色譜圖

圖2 全氟化合物標(biāo)樣色譜圖

圖3 樣品加標(biāo)色譜圖

2.2加標(biāo)回收率

血清中全氟化合物經(jīng)固相萃取、濃縮等前處理，LC-MS/MS檢測，得到加標(biāo)回收率及重復(fù)性，具體結(jié)果見表3。

表3 血清中全氟化合物加標(biāo)回收率結(jié)果

總結(jié)

本文參考《超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道肼高分辨質(zhì)譜法同時(shí)測定血清中12種全氟化合物》中的方法，使用萊伯泰科SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)和M64高通量平行濃縮儀，對(duì)牛血清中的10種全氟化合物進(jìn)行萃取和濃縮，并用液相色譜分離，電噴霧離子源（ESI）電離，多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）檢測。從表3可以看出，牛血清中5種全氟化合物有檢出，其中含量較高的為PFOA和PFOS，分別為0.59μg/L和0.50μg/L；10種全氟化合物的加標(biāo)回收率為53.6%-117.8%，RSD為4.9%-12.1%。

萊伯泰科SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)最多八個(gè)樣品同時(shí)上樣，具備上樣及部分上樣兩種上樣模式，同時(shí)收集架可直接放入M64高通量平行濃縮儀中進(jìn)行氮吹濃縮操作，中間無需樣品轉(zhuǎn)移可提高實(shí)驗(yàn)效率及減少目標(biāo)物損失，兩款儀器無本底殘留且使用方法簡便，適用于血清中全氟化合物的檢測分析。

參考文獻(xiàn)

王錚,張濟(jì)明,郭劍秋,等.超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道肼高分辨質(zhì)譜法同時(shí)測定血清中12種全氟化合物[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué),2021,38（3）:238-244,253.